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豬ELISA試劑盒 PIG ELISA KIT

豬流行性腹瀉抗原(PED-Ag)ELISA試劑盒
豬流行性腹瀉抗原(PED-Ag)ELISA試劑盒

豬流行性腹瀉抗原(PED-Ag)ELISA試劑盒

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產品介紹

產品名稱:豬流行性腹瀉抗原(PED-Ag)ELISA試劑盒

貨號:QY-P50169

英文名稱:Porcine PED-Ag ELISA Kit

類別:酶聯免疫分析檢測試劑盒

規格:96T/48T

包裝:盒

檢測原理:采用雙抗夾心法

保質期:六個月

產品保存條件:2-8°C

應用范圍:僅供科研研究實驗使用

樣品形式:血清/血漿/組織勻漿/細胞培養上清//其它生物液體(具體情況請咨詢)

標本的采集及保存

1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存  過程 中  如有沉淀形成,應再次離心。

2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

3.尿液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000分)。仔細收集上清。  檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以 使細胞破壞并 放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

標本要求: 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

試劑盒組成:

48孔配制:

1. 說明書: 1

2. 封板膜:  2片(48

3. 密封袋:  1

酶標包被板: 1×48 (2-8℃保存)

5. 標準品:    0.5ml×1(2-8℃保存)

6. 標準品稀釋液: 1.5ml×1(2-8℃保存)

7. 酶標試劑:     3 ml×1(2-8℃保存)

8. 樣品稀釋液: 3 ml×1(2-8℃保存)

9. 顯色劑A液: 3 ml×1(2-8℃保存)

10 .顯色劑B液:  3 ml×1(2-8℃保存)

11 .終止液:3ml×1(2-8℃保存)

12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1(2-8℃保存)

96孔配置:

1.  說明書:1

2.  封板膜:2片(96

3.  密封袋: 1

4.  酶標包被板:1×96 (2-8℃保存)

5.  標準品:0.5ml×1(2-8℃保存)

6.  標準品稀釋液:1.5ml×1(2-8℃保存)

7.  酶標試劑: 3 ml×1(2-8℃保存)

8.  樣品稀釋液: 3 ml×1(2-8℃保存)

9.  顯色劑A液:3 ml×1(2-8℃保存)

10. 顯色劑B液:3 ml×1(2-8℃保存)

11. 終止液:3ml×1(2-8℃保存)

12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1(2-8℃保存)

需要自備的試劑和器材

1.37℃恒溫箱。

2.標準規格酶標儀。

3.精密移液器及一次性吸頭

4.蒸餾水,

5.一次性試管

6.吸水紙

操作步驟

1、標準品的稀釋:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為9mmol/L,6 mmol/L,3 mmol/L,1.5mmol/L, 0.75 mmol/L)。

2、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4、配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。

5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7、溫育:操作同3。

8、洗滌:操作同5。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘

10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

注意事項:

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

底物請避光保存。

嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

本試劑不同批號組分不得混用。

如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

計算:

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,    

在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD      

值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋      

倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值      

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      

倍數,即為樣品的實際濃度。  

檢測范圍、 OD值:

具體請咨詢在線客服,或者來電索要詳細說明書!

 

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